美國(guó)路陽(yáng)UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀在Northern blotting、Southern blotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯(lián)、Sterilization(滅菌)、DNA Nicking(DNA缺失)的應(yīng)用。
1.Membrane Blotting
美國(guó)路陽(yáng)儀器設(shè)備有限公司UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀可用于Northern、Southern blotting、EMSA等膜交聯(lián),當(dāng)使用254 nm波長(zhǎng)、能量為120.0mJ/cm2交聯(lián)時(shí),尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價(jià)鍵穩(wěn)定。
(1)將一張或兩張用轉(zhuǎn)移緩沖液(如10×SSC)輕輕潤(rùn)濕的吸水紙放在UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀的紫外輻照室。將尼龍膜放在吸水紙上,使附著核酸的一面朝上,使紫外線燈管能夠直接照射核酸。
(2)關(guān)閉UCL-3500系列紫外交聯(lián)儀的門。
(3)按下STAR(運(yùn)行)按鍵啟動(dòng),當(dāng)紫外線燈管亮?xí)r,顯示屏將立即開始從輸入值開始累計(jì)。如果在曝光期間的任何點(diǎn)打開門,照射將停止,并顯示已曝光值。(關(guān)上門按STAR按鍵繼續(xù)照射。)
(4)輻照完成后,蜂鳴器將鳴響約3–4秒。自動(dòng)交聯(lián)大約需要25–50秒。
(5)取下尼龍膜并關(guān)上門,交聯(lián)完成。每次使用后,清潔紫外線交儀紫外輻照室,以清除殘留的鹽。
2.DNA Nicking
美國(guó)路陽(yáng)儀器設(shè)備有限公司UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀也可用于切割溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠中的DNA,代替HCl洗滌液,瓊脂糖凝膠中比較大的DNA(>20kb)的轉(zhuǎn)模效率很低,因此DNA在轉(zhuǎn)移到尼龍膜之前需要進(jìn)行前處理。DNA可通過HCl或紫外線照射進(jìn)行切割。HCl脫嘌呤反應(yīng)較難控制,且對(duì)溫度極為敏感。所以在轉(zhuǎn)移前,在短波長(zhǎng)紫外光(254 nm)中80.0mJ/cm2切割DNA的方法更可靠。
3.Sterilization(滅菌)
紫外線shajun就是通過紫外線照射,破壞及改變微生物的DNA(脫氧核糖核酸)結(jié)構(gòu),使細(xì)菌當(dāng)即死亡或不能繁殖,達(dá)到shajun的目的。真正具有shajun作用的是UVC紫外線,因?yàn)镃波段紫外線很容易被生物體的DNA吸收,尤其是254nm波長(zhǎng)左右紫外線佳。紫外線shajun屬于純物理方法,具有簡(jiǎn)單便捷、光譜高效、無二次污染。因此在短波長(zhǎng)紫外光(254 nm)中滅菌95sec。
4.RecA Screening(RecA篩選)
UCL-3200/UCL-3500紫外交聯(lián)儀也可用于篩選RecA突變體,在短波長(zhǎng)紫外光(254 nm)中40.0mJ/cm2照射下,recA突變體阻止了紫外線誘導(dǎo)損傷的修復(fù),阻止了紫外照射過的過的recA細(xì)胞的生長(zhǎng)。